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          新聞詳情
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          酶標(biāo)儀的檢測原理

          日期:2025-06-19 00:54
          瀏覽次數(shù):11758
          摘要:

          光是電磁波,波長100nm400nm稱為紫外光, 400nm780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
            檢測單位:

            光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
            檢測單位用OD值表示, ODoptical delnsity(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD1og1trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
          E
          OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 為在檢測物之前的光強(qiáng)度,Ι為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。
            OD值由下述公式計(jì)算:
            EOD=C×D×E
            C為檢測物的濃度

            D為檢測物的厚度
            E為摩爾因子
            在特定波長下測定每種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測,稱為測量波
          長。
            但是每種物質(zhì)對光能量還存在定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取個參照波長,以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下,檢測物光的吸收小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
            Anthos 酶標(biāo)儀檢測值計(jì)算
            儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉(zhuǎn)換成進(jìn)位數(shù)字信號,大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實(shí)際檢測中,檢測物的透光值均在 0100%之間。透光值
          的計(jì)算如下:
            T=(Meas—Min)/(Max—Min
            其中T為透光值, Meas為檢測的進(jìn)位數(shù)值, Min為在 0%的情況下檢測的進(jìn)位數(shù)值, Max為在100%的情況下檢測的進(jìn)位數(shù)值,舉例如下:
            MaX=3600 Mn=20 Meas30
            T=30-20/3600-20)0
          0028
            OD1og1/T=1og1/0.0028
          =2.552
            Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位

            儀器會自動對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位,中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每個酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時,儀器其實(shí)要進(jìn)行35個點(diǎn)的測量,選取中間的5個點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
            光源的參照通道

            參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
            酶標(biāo)儀的用途和其它提示
            用于ELISA試劑的測定,廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室,包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
            質(zhì)量控制
            質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
            空白校正
            有些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的,請按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。
            檢測結(jié)果的解釋
            由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測試劑的體積,都會造成OD值的不同,因此,只有使用同酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進(jìn)行。

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